Question

6．H18雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗人肝癌單克隆抗體HAb18對(duì)于人體肝癌的靶向治療具有重要的意義，但H18雜交瘤細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中的凋亡現(xiàn)象制約著細(xì)胞的高密度培養(yǎng)以及生產(chǎn)能力的提高．通過(guò)基因工程可改造H18雜交瘤細(xì)胞的抗凋亡能力，相關(guān)研究步驟如下：
①細(xì)胞培養(yǎng)：將人肝癌細(xì)胞在含10%小牛血清的培養(yǎng)液中培養(yǎng)．一段時(shí)間后，用胰蛋白酶處理培養(yǎng)液，漂洗后調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為1×10⁷個(gè)•mL^-1．
②免疫小鼠：向小鼠體內(nèi)注射肝癌細(xì)胞懸液0.8mL，以后每隔2周免疫1次，共3次，最后一次免疫后3天，取脾臟制成細(xì)胞懸液備用．
③細(xì)胞融合及篩選：將脾臟細(xì)胞懸液和骨髓瘤細(xì)胞懸液在50%PEG作用下進(jìn)行融合，篩選出能產(chǎn)生抗人肝癌單克隆抗體HAb18的H18雜交瘤細(xì)胞．
④改造H18雜交瘤細(xì)胞：利用PCR技術(shù)獲得小鼠的bcl-X_L基因（抗凋亡基因），構(gòu)建表達(dá)載體，通過(guò)脂質(zhì)體法導(dǎo)入H18雜交瘤細(xì)胞，再篩選出抗凋亡能力明顯提高的H18雜交瘤細(xì)胞．
請(qǐng)分析回答：
（1）步驟①肝癌細(xì)胞培養(yǎng)液中加入小牛血清的目的是補(bǔ)充細(xì)胞生長(zhǎng)所需的未知營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，培養(yǎng)液中還需加入一定量抗生素的目的是防止雜菌污染．
（2）步驟②中，肝癌細(xì)胞免疫小鼠需在一定時(shí)間內(nèi)間隔注射3次，其目的是加強(qiáng)免疫，刺激小鼠機(jī)體產(chǎn)生更多的淋巴細(xì)胞．
（3）步驟③中，除了用50%PEG促進(jìn)細(xì)胞融合外，常用的生物誘導(dǎo)因素是滅活的病毒．步驟④中通過(guò)脂質(zhì)體法將表達(dá)載體導(dǎo)入H18雜交瘤細(xì)胞的原理是膜的流動(dòng)性．
（4）與普通抗肝癌藥物相比，用抗人肝癌單克隆抗體HAb18與相應(yīng)抗癌藥物結(jié)合制成的“生物導(dǎo)彈”治療肝癌的主要優(yōu)點(diǎn)是能將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在部位，減少對(duì)正常細(xì)胞的傷害，減少用藥劑量．
（5）乙醇有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用．為了建立H18雜交瘤細(xì)胞凋亡檢測(cè)模型，科研人員利用不同濃度的乙醇溶液誘導(dǎo)H18雜交瘤細(xì)胞凋亡，其結(jié)果如圖所示．抗凋亡細(xì)胞株的建立與篩選應(yīng)選擇的條件是510mmol/L乙醇誘導(dǎo)6h．

Answer 1

分析 分析柱形圖：該實(shí)驗(yàn)的自變量乙醇誘導(dǎo)的時(shí)間及乙醇的濃度，因變量是凋亡細(xì)胞的比例，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知：乙醇濃度為510mmol/L，誘導(dǎo)6h～7h，細(xì)胞凋亡的比例最高．

解答 解：（1）步驟①肝癌細(xì)胞培養(yǎng)液中加入小牛血清的目的是：補(bǔ)充細(xì)胞生長(zhǎng)所需的未知營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)．培養(yǎng)液中還需加入一定量抗生素的目的是：防止雜菌污染．
（2）肝癌細(xì)胞免疫小鼠需在一定時(shí)間內(nèi)間隔注射3次，其目的是強(qiáng)免疫，刺激小鼠機(jī)體產(chǎn)生更多的淋巴細(xì)胞．
（3）步驟③中，除了用50%PEG促進(jìn)細(xì)胞融合外，常用的生物誘導(dǎo)因素是滅活的病毒，傳統(tǒng)的脂質(zhì)體是將磷脂、膽固醇或其它脂類(lèi)的乙醚溶液加入到DNA溶液中，經(jīng)特殊處理而得到單層或雙層的帶DNA的脂質(zhì)體小泡，其可被受體細(xì)胞內(nèi)吞而實(shí)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)移．步驟④中通過(guò)脂質(zhì)體法將表達(dá)載體導(dǎo)入H18雜交瘤細(xì)胞的原理是膜的流動(dòng)性．
（4）與普通抗肝癌藥物相比，用抗人肝癌單克隆抗體HAb18與相應(yīng)抗癌藥物結(jié)合制成的“生物導(dǎo)彈”治療肝癌的主要優(yōu)點(diǎn)是：能將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在部位，減少對(duì)正常細(xì)胞的傷害，減少用藥劑量
（5）乙醇有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用．為了建立H18雜交瘤細(xì)胞凋亡檢測(cè)模型，科研人員利用不同濃度的乙醇溶液誘導(dǎo)H18雜交瘤細(xì)胞凋亡，其結(jié)果如圖所示．抗凋亡細(xì)胞株的建立與篩選應(yīng)選擇的條件是510mmol/L乙醇誘導(dǎo)6h，此時(shí)凋亡細(xì)胞比例最大．
故答案為：
（1）補(bǔ)充細(xì)胞生長(zhǎng)所需的未知營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)    防止雜菌污染
（2）加強(qiáng)免疫，刺激小鼠機(jī)體產(chǎn)生更多的淋巴細(xì)胞（3）滅活的病毒   膜的流動(dòng)性
（4）能將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在部位，減少對(duì)正常細(xì)胞的傷害，減少用藥劑量
（5）510mmol/L乙醇誘導(dǎo)6h

點(diǎn)評(píng) 本題是探究性實(shí)驗(yàn)，意在考查考生分析柱形圖，獲取實(shí)驗(yàn)結(jié)論的能力，對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件的識(shí)記和理解能力，難度中等．