Question

15．在某些深海魚(yú)中發(fā)現(xiàn)的抗凍蛋白基因A控制合成的抗凍蛋白A有較好的應(yīng)用價(jià)值，通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得抗寒能力提高的植株．回答有關(guān)問(wèn)題：
（1）從深海魚(yú)提取和純化DNA時(shí)，選擇NaCl溶液的合適濃度，利用DNA和其它雜質(zhì)在不同NaCl溶液中溶解度不同的特性，達(dá)到分離目的，加入一定量可以進(jìn)一步獲得含雜質(zhì)較少的DNA．
（2）構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)，用不同類(lèi)型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生末端．若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生黏性末端的限制酶．
（3）為了檢測(cè)A基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成抗凍蛋白A，需從轉(zhuǎn)基因生物提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原抗體雜交．
（4）若要用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)，制備抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞，并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞按一定比例加入試管中，再加入誘導(dǎo)細(xì)胞融合．細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)完成后，融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞外，可能還有，體系中出現(xiàn)多種類(lèi)型細(xì)胞的原因是細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且融合率達(dá)不到100%．

Answer 1

分析 基因工程的操作步驟為：
第一步：目的基因的獲取
（1）目的基因是指：編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因．
（2）原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法．
（3）PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因
第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建
（1）目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用．
（2）組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因
第三步：將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞
（1）轉(zhuǎn)化的概念：是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程．
（2）常用的轉(zhuǎn)化方法：
將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞：采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等．
將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞：最常用的方法是顯微注射技術(shù)．此方法的受體細(xì)胞多是受精卵．
將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞：Ca²⁺轉(zhuǎn)化法．
（3）重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后，篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)．
第四步：目的基因的檢測(cè)和表達(dá)
（1）首先要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術(shù)．
（2）其次還要檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，方法是用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交．
（3）最后檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原--抗體雜交．
（4）有時(shí)還需進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定．如轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)植物是否出現(xiàn)抗蟲(chóng)性狀．

解答 解：（1）利用DNA和其它雜質(zhì)在不同NaCl溶液中溶解度不同的特性，達(dá)到分離DNA的目的，根據(jù)DNA在冷酒精中凝集效果最佳，可以進(jìn)一步獲得含雜質(zhì)較少的DNA．
（2）構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)，用不同類(lèi)型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生粘性末端或平末端，用同一種限制酶切割后產(chǎn)生的末端相同，可以直接相連．
（3）檢測(cè)基因工程中目的基因表達(dá)產(chǎn)物，可以提取蛋白質(zhì)，進(jìn)行抗原抗體雜交．
（4）制備抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞，應(yīng)該用免疫的小鼠B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，一般用滅活的密病毒做誘導(dǎo)劑．由于細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且融合率達(dá)不到100%，所以融合的細(xì)胞除了雜交瘤細(xì)胞外，還可能有B淋巴細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞．
故答案為：
（1）溶解度不同 冷卻酒精
（2）平  相同 
（3）蛋白質(zhì)  抗原抗體雜交
（4）聚乙二醇（PEG、滅活的病毒）     B淋巴細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞   細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且融合率達(dá)不到100%

點(diǎn)評(píng) 此題較簡(jiǎn)單，要求學(xué)生對(duì)基因工程四個(gè)步驟中每個(gè)步驟中具體細(xì)節(jié)要進(jìn)行充分的記憶．同時(shí)還要求學(xué)生學(xué)會(huì)讀題、審題，并分析解題的能力，難度中等．