Question

13．下圖是利用基因工程和植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得新植株的過程，請(qǐng)回答：

（1）圖中A表示Ti質(zhì)粒的T-DNA，切割A(yù)需要使用限制酶．
（2）C→D過程需要使用Ca²⁺處理，使D處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的一種生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞．
（3）培養(yǎng)E需要添加營養(yǎng)物質(zhì)和植物激素，其目的是誘導(dǎo)細(xì)胞通過脫分化和再分化過程發(fā)育為完整植株，培養(yǎng)要求無菌操作的原因是雜菌的生長(zhǎng)一方面會(huì)與目標(biāo)培養(yǎng)物競(jìng)爭(zhēng)營養(yǎng)，從而使其失去營養(yǎng)；另一方面會(huì)產(chǎn)生大量對(duì)目標(biāo)培養(yǎng)物有害的物質(zhì)，導(dǎo)致其不能正常生長(zhǎng)甚至死亡．
（4）植株組織培養(yǎng)過程中，判斷愈傷組織是否產(chǎn)生，依據(jù)是看是否產(chǎn)生了排列疏松，呈不定形狀態(tài)、高度液泡化的薄壁的細(xì)胞．由愈傷組織再分化過程中需要光照，原因是葉肉細(xì)胞中的葉綠素的合成需要光照．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、分析題圖：A是質(zhì)粒，B是目的基因，C是基因表達(dá)載體，D是農(nóng)桿菌細(xì)胞，E是受體細(xì)胞．

解答 解：（1）農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒是擬核外環(huán)狀DNA分子，分布在細(xì)菌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，圖中A表示Ti質(zhì)粒的T-DNA；切割A(yù)需要使用限制性內(nèi)切酶．
（2）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞常用感受態(tài)細(xì)胞法，即常用Ca²⁺處理微生物細(xì)胞，使其成為能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞．
（3）培養(yǎng)E需要添加營養(yǎng)物質(zhì)和植物激素，其目的是誘導(dǎo)細(xì)胞通過脫分化和再分化過程發(fā)育為完整植株；培養(yǎng)要求無菌操作的原因是雜菌的生長(zhǎng)一方面會(huì)與目標(biāo)培養(yǎng)物競(jìng)爭(zhēng)營養(yǎng)，從而使其失去營養(yǎng)；另一方面會(huì)產(chǎn)生大量對(duì)目標(biāo)培養(yǎng)物有害的物質(zhì)，導(dǎo)致其不能正常生長(zhǎng)甚至死亡．
（4）判斷愈傷組織是否產(chǎn)生，依據(jù)是：看是否產(chǎn)生了排列疏松而無規(guī)則、高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的細(xì)胞．由愈傷組織再分化過程中需要光照，原因是葉肉細(xì)胞中的葉綠素的合成需要光照．
故答案為：
（1）T-DNA   限制酶
（2）Ca²⁺   能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的
（3）脫分化和再分化   雜菌的生長(zhǎng)一方面會(huì)與目標(biāo)培養(yǎng)物競(jìng)爭(zhēng)營養(yǎng)，從而使其失去營養(yǎng)；另一方面會(huì)產(chǎn)生大量對(duì)目標(biāo)培養(yǎng)物有害的物質(zhì)，導(dǎo)致其不能正常生長(zhǎng)甚至死亡
（4）排列疏松，呈不定形狀態(tài)、高度液泡化的薄壁    葉肉細(xì)胞中的葉綠素的合成需要光照

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程和細(xì)胞工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)問題；識(shí)記植物組織培養(yǎng)過程，掌握植物組織培養(yǎng)的條件，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．