Question

1．纖維素酶是將纖維素水解成葡萄糖的一種復(fù)合酶，在生物燃料制作、布料處理中起重要作用．圖示纖維素酶的相關(guān)提取過程，請(qǐng)回答：

（1）從土壤中獲取纖維素分解菌時(shí)，應(yīng)選擇富含纖維素的環(huán)境采集土樣．
（2）篩選纖維素分解菌，可采用剛果紅染色法．下列關(guān)于該培養(yǎng)基制備的敘述錯(cuò)誤的有BC（雙選）
A．配制固體培養(yǎng)基時(shí)可加入瓊脂作為凝固劑
B．平板冷凝后需倒置的原因是讓培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水充分落入培養(yǎng)基
C．操作的順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌
D．培養(yǎng)基中能夠?yàn)榫�體的生長(zhǎng)提供碳源的是淀粉和纖維素粉
（3）實(shí)驗(yàn)時(shí)，加入染色劑的方法有兩種，方法一是先培養(yǎng)微生物，再加入染色劑，方法二是在倒平板時(shí)就加入染色劑．兩種方法中會(huì)出現(xiàn)“假陽性反應(yīng)”的是方法二．
（4）在對(duì)纖維素分解菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，為選出菌落數(shù)符合要求的平板，常需要在涂布前用無菌水對(duì)樣品進(jìn)行稀釋．若培養(yǎng)基被雜菌污染，通常會(huì)導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)結(jié)果比實(shí)際數(shù)目高（填“高”或“低”），為檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染，可對(duì)其進(jìn)行空白培養(yǎng)．

Answer 1

分析 1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：
（1）計(jì)算：依據(jù)是培養(yǎng)基配方的比例．
（2）稱量：牛肉膏比較黏稠，可同稱量紙一塊稱�。�牛肉膏和蛋白胨易吸潮，稱取時(shí)動(dòng)作要迅速，稱后及時(shí)蓋上瓶蓋．
（3）溶化：牛肉膏和稱量紙+水加熱取出稱量紙→加蛋白胨和氯化鈉→加瓊脂（注意：要不斷用玻璃棒攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂）→補(bǔ)加蒸餾水至100mL．
（4）調(diào)pH；
（5）滅菌：培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，培養(yǎng)皿采用干熱滅菌．
（6）倒平板．
2、分解纖維素的微生物的分離實(shí)驗(yàn)的原理：
①土壤中存在著大量纖維素分解酶，包括真菌、細(xì)菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶．纖維素酶是一種復(fù)合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進(jìn)一步分解為葡萄糖使微生物加以利用，故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長(zhǎng)，其他微生物則不能生長(zhǎng)．
②在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌．

解答 解：（1）篩選纖維素分解菌時(shí)土壤取樣需要到富含纖維素的環(huán)境中取樣．
（2）篩選纖維素分解菌，可采用剛果紅染色法，其原理是：在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌．
A、配制固體培養(yǎng)基時(shí)可加入瓊脂作為凝固劑，A正確；
B、平板冷凝后需倒置的原因是不讓培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，防止造成污染，B錯(cuò)誤；
C、操作的順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，C錯(cuò)誤；
D、培養(yǎng)基中能夠?yàn)榫�體的生長(zhǎng)提供碳源的是淀粉和纖維素粉，D正確．
故選：BC．
（3）實(shí)驗(yàn)時(shí)，加入染色劑的方法有兩種，方法一是先培養(yǎng)微生物，再加入染色劑，方法二是在倒平板時(shí)就加入染色劑．第一種方法會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜，第二種方法：產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊的透明圈，有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈．因此，兩種方法中會(huì)出現(xiàn)“假陽性反應(yīng)”的是方法二．
（4）在對(duì)纖維素分解菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，為選出菌落數(shù)符合要求的平板，常需要在涂布前用無菌水對(duì)樣品進(jìn)行稀釋；若培養(yǎng)基被雜菌污染，通常會(huì)導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)結(jié)果比實(shí)際數(shù)目高；為檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染，可對(duì)其進(jìn)行空白培養(yǎng)．
故答案為：
（1）富含纖維素
（2）剛果紅染色     BC
（3）倒平板         方法二
（4）無菌水         高            空白培養(yǎng)

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖示主要考查微生物的篩選、培養(yǎng)、鑒定等知識(shí)，要求考生識(shí)記纖維素分解菌分離實(shí)驗(yàn)的原理；識(shí)記制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟；識(shí)記微生物計(jì)數(shù)等知識(shí)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．