Question

【題目】制備單克隆抗體通常選用細(xì)胞融合技術(shù)，將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，融合成功的細(xì)胞經(jīng)過(guò)篩選就是所需要的雜交瘤細(xì)胞�？茖W(xué)家從某無(wú)限增殖細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中分離出無(wú)限增殖調(diào)控基因(prG)，該基因能激發(fā)細(xì)胞分裂，這為單克隆抗體的制備提供了新思路。某國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備探索利用基因工程生產(chǎn)單克隆抗體，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)獲得無(wú)限增殖調(diào)控基因(prG)，可以用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，94℃高溫使DNA雙鏈打開(kāi)，這一步是打開(kāi)____鍵，這一過(guò)程在細(xì)胞內(nèi)是通過(guò)____酶實(shí)現(xiàn)的，DNA分子復(fù)制時(shí)需要引物，若將一個(gè)DNA分子復(fù)制3次，需要在緩沖液中至少加入____個(gè)引物。

(2)該基因工程操作的核心是__________，本研究中受體細(xì)胞為__________，欲將目的基因轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞，常采用__________方法。若實(shí)驗(yàn)成功，則受體細(xì)胞既，能__________，又能__________。

Answer 1

【答案】 氫 解旋 14 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 （經(jīng)抗原刺激）的B淋巴細(xì)胞（或漿細(xì)胞） 顯微注射 無(wú)限增殖 產(chǎn)生特異性抗體

【解析】試題分析: PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。PCR的原理是DNA復(fù)制，需要的條件包括：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），PCR擴(kuò)增DNA的過(guò)程包括：高溫變性、低溫復(fù)性、中溫延伸過(guò)程。因此,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過(guò)程中，目的基因受熱形成單鏈并與引物結(jié)合，在Taq聚合酶的作用下延伸形成DNA。

(1) 用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，94℃高溫使DNA雙鏈之間的氫鍵打開(kāi)，而這一過(guò)程在細(xì)胞內(nèi)是通過(guò)解旋酶實(shí)現(xiàn)的。DNA分子復(fù)制時(shí)子鏈延伸需要引物，若將一個(gè)DNA分子復(fù)制3次，由于共需要形成2+4+8=14條子鏈，所以在緩沖液中至少加入14個(gè)引物。

(2)基因工程操作的四個(gè)基本步驟是：獲取目的基因、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞和目的基因的檢測(cè)與鑒定。其中核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建。抗體是由已獲得免疫的(經(jīng)抗原刺激)B細(xì)胞分泌的，將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞常采用的方法是顯微注射法，若實(shí)驗(yàn)成功，則受體細(xì)胞既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體。