Question

3．小鼠的線粒體融合蛋白2基因（Mfn2）參與細(xì)胞周數(shù)調(diào)控．為研究該基因?qū)β涯讣?xì)胞體外成熟過程的影響，科研人員通過如圖過程獲得三組小鼠卵母細(xì)胞，培養(yǎng)一段時(shí)間后，檢測(cè)各組Mfn2的表達(dá)量，并統(tǒng)計(jì)第一極體的排出率以判斷卵母細(xì)胞的成熟情況．其中，將Mfn2基因與帶有熒光蛋白基因（Venus）的載體重組，表達(dá)出的融合蛋白帶有熒光，可以借此追蹤Mfn2的表達(dá)．請(qǐng)據(jù)圖回答問題．

（1）過程①表示逆轉(zhuǎn)錄．
（2）過程②表示在多種cDNA中定向擴(kuò)增Mfn2，需要利用PCR技術(shù)．設(shè)計(jì)引物時(shí)，除了要保證引物與Mfn2互補(bǔ)外，還應(yīng)在引物的序列中添加NheⅠ和HindⅢ（填圖中限制酶名稱）的酶切位點(diǎn)，以便對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雙酶切處理．
（3）設(shè)置第2組進(jìn)行對(duì)照的目的是排除載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響．
（4）檢測(cè)發(fā)：與第1組和第2組相比，第3組細(xì)胞中Mfn2的相對(duì)表達(dá)量明顯增多，且第一極體排出率低，這一結(jié)果表明Mfn2的表達(dá)增多對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟過程具有抑制作用．

Answer 1

分析 分析圖形：圖中①表示RNA逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA的過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶；②表示表示在多種cDNA中定向擴(kuò)增Mfn2，需要PCR技術(shù)；然后將目的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物注入導(dǎo)入小鼠的卵母細(xì)胞，在適宜的條件下培養(yǎng)．

解答 解：（1）圖中①表示RNA逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA的過程．
（2）②表示表示在多種cDNA中定向擴(kuò)增Mfn2，需要PCR技術(shù)．根據(jù)圖中質(zhì)粒中三個(gè)限制酶的切點(diǎn)，其中有一個(gè)在標(biāo)記基因上，所以在PCR技術(shù)中，應(yīng)在引物的序列中添加NheⅠ和HindⅢ的酶切位點(diǎn)，以便對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雙酶切處理．
（3）設(shè)置第2組對(duì)照實(shí)驗(yàn)的目的是為了排除載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響．
（4）檢測(cè)發(fā)：與第1組和第2組相比，第3組細(xì)胞中Mfn2的相對(duì)表達(dá)量明顯增多，且第一極體排出率低，說明Mfn2的表達(dá)增多對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟過程具有抑制作用．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄
（2）PCR   NheⅠ和HindⅢ
（3）排除載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
（4）抑制

點(diǎn)評(píng) 本題以基因治療的流程圖為載體，考查了基因工程、細(xì)胞工程以及胚胎工程等方面的知識(shí)，難度適中．考生要能夠識(shí)記細(xì)胞核移植的過程；識(shí)記囊胚包括內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層兩部分；明確基因工程中質(zhì)粒和目的基因需要利用同種限制酶進(jìn)行切割；掌握目的基因檢測(cè)和鑒定的一般方法等．