Question

14．利用生物工程技術(shù)，可從轉(zhuǎn)基因奶山羊乳汁中分離獲得凝血因子IV，用于血友病的治療．請(qǐng)回答下列問題：
（1）根據(jù)凝血因子IV基因的堿基序列，可用PCR技術(shù)獲取并擴(kuò)增基因．構(gòu)建該基因表達(dá)載體時(shí)，所用到的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶，該基因表達(dá)載體中，除凝血因子IV和標(biāo)記基因外，還應(yīng)該包括啟動(dòng)子和終止子．
（2）將目的基因表達(dá)載體導(dǎo)入奶山羊受精卵的常用方法是顯微注射法．受體細(xì)胞選用受精卵的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞大易操作、營養(yǎng)物質(zhì)含量高和細(xì)胞全能性高．
（3）在體外胚胎培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)選用囊胚的滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行DNA分析，用于選擇雌性胚胎．
（4）人凝血因子IV是一種胞外酶，該蛋白的加工是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器上進(jìn)行的．人凝血因子IV只在乳腺細(xì)胞合成的原因是基因的選擇性表達(dá)．

Answer 1

分析 1、啟動(dòng)子：是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質(zhì)．
終止子：也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的尾端．
2、分泌蛋白的合成、加工和運(yùn)輸過程：最初是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體中由氨基酸形成肽鏈，肽鏈進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)行加工，形成有一定空間結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)由囊泡包裹著到達(dá)高爾基體，高爾基體對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步加工，然后形成囊泡分泌到細(xì)胞外．
3、在做胚胎性別鑒定時(shí)，需要取囊胚的滋養(yǎng)層細(xì)胞做DNA分析，進(jìn)行性別鑒定．

解答 解：（1）可以根據(jù)基因編碼序列兩端的部分堿基序列設(shè)計(jì)引物，用PCR技術(shù)進(jìn)行體外大量擴(kuò)增獲得目的基因．構(gòu)建該基因表達(dá)載體時(shí)，需要限制酶內(nèi)切酶切割目的基因和運(yùn)載體，再用DNA連接酶鏈接，形成表達(dá)載體．啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質(zhì)．終止子也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的尾端．
（2）受體細(xì)胞是動(dòng)物細(xì)胞，常用顯微注射法將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞中．由于受精卵細(xì)胞大易操作、營養(yǎng)物質(zhì)含量高、細(xì)胞全能性高，因此常被作為受體細(xì)胞選用．
（3）在做胚胎性別鑒定時(shí)，需要取囊胚的滋養(yǎng)層細(xì)胞做DNA分析，進(jìn)行性別鑒定．
（4）分泌蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體上合成，進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)行加工、分類、包裝，形成囊泡進(jìn)入高爾基體，由高爾基體進(jìn)行進(jìn)一步加工，形成囊泡，運(yùn)向細(xì)胞膜，由細(xì)胞膜分泌到細(xì)胞外．由于基因的選擇性表達(dá)，所以人凝血因子IV只在乳腺細(xì)胞合成．
故答案為：
（1）PCR   限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶   啟動(dòng)子和終止子
（2）顯微注射法   細(xì)胞全能性高
（3）滋養(yǎng)層細(xì)胞
（4）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體      基因的選擇性表達(dá)

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程、細(xì)胞工程和胚胎工程等知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的基本操作步驟；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件；識(shí)記胚胎工程的相關(guān)技術(shù)及操作，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記層次的考查．