Question

10．水污染是全球性的環(huán)境問題，微生物降解是水污染治理的有效手段之一．聚乙烯醇（PVA）是存在于化工污水中的一種難以降解的大分子有機物，PVA分解菌能產生PVA酶分解PVA，PVA與碘作用時能產生藍綠色復合物，當PVA被分解時藍綠色復合物消失，形成白色透明斑，請回答下列問題：
（1）要從土壤中篩選出能高效分解PVA的細菌，應采用以聚乙烯醇（或PVA）作為唯一的碳源的選擇培養(yǎng)基，實驗中還應設置對照組．將菌液稀釋相同的倍數，對照組培養(yǎng)基上生長的菌落數目應明顯多于（多于/少于）選擇培養(yǎng)基上的數目，從而說明選擇培養(yǎng)基具有篩選作用．
（2）要測定土壤稀釋液中微生物的數目，可在顯微鏡下用血細胞（血球）計數板直接計數．若將100ml含有PVA分解菌的土壤樣品溶液稀釋10⁴倍后，取0.1ml稀釋液均勻涂布在選擇培養(yǎng)基表面，測得菌落數的平均值為160個，空白對照組平板上未出現(xiàn)菌落，則100ml原菌液中有PVA分解菌1.6×10⁹個，該方法的測量值與實際值相比一般會偏�。ㄆ�大/偏小/相等）．
（3）要鑒定分離出的細菌是否為PVA分解菌，培養(yǎng)PVA分解菌的培養(yǎng)基中除了加入必需的營養(yǎng)物質外還需要加入碘用于鑒別PVA分解菌．要比較不同菌株降解PVA能力的大小，用含相同PVA濃度的上述培養(yǎng)基來培養(yǎng)不同菌株，一定時間后，通過測定白色透明斑的大�。ɑ蛑睆剑﹣泶_定不同菌株降解PVA能力的大�。�
（4）提取橘皮精油，常采用壓榨法而不用水蒸汽蒸餾法，原因是橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時會發(fā)生部分水解，又會產生原料焦糊等問題．

Answer 1

分析 1、選擇培養(yǎng)基是根據某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率．
2、統(tǒng)計菌落數目的方法
（1）顯微鏡直接計數法：①原理：利用特定細菌計數板或血細胞計數板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數量；②方法：用計數板計數； ③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌．
（2）間接計數法（活菌計數法）
 ①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌．通過統(tǒng)計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌．
②操作
a、設置重復組，增強實驗的說服力與準確性．
b、為了保證結果準確，一般選擇菌落數在30～300的平板進行計數．
③計算公式：每克樣品中的菌株數=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數．

解答 解：（1）分析題意可知，要從土壤中篩選出能高效分解PVA的細菌，應采用以聚乙烯醇（或PVA）作為唯一的碳源的選擇培養(yǎng)基，實驗中還應設置對照組．將菌液稀釋相同的倍數，對照組培養(yǎng)基上生長的菌落數目應明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數目，從而說明選擇培養(yǎng)基具有篩選作用．
（2）要測定土壤稀釋液中微生物的數目，可在顯微鏡下用血細胞（血球）計數板直接計數．若將100ml含有PVA分解菌的土壤樣品溶液稀釋10⁴倍后，取0.1ml稀釋液均勻涂布在選擇培養(yǎng)基表面，測得菌落數的平均值為160個，空白對照組平板上未出現(xiàn)菌落，則100ml原菌液中有PVA分解菌=160÷0.1×10⁴×100=1.6×10⁹個．由于兩個或兩個以上的細菌在一起時只能長成一個菌落，因此該方法的測量值與實際值相比一般會偏�。�
（3）根據題意可知“PVA分解菌能產生PVA酶分解PVA，PVA與碘作用時能產生藍綠色復合物，當PVA被分解時藍綠色復合物消失，形成白色透明斑”，因此要比較不同菌株降解PVA能力的大小，用含相同PVA濃度的上述培養(yǎng)基來培養(yǎng)不同菌株，一定時間后，通過測定白色透明斑的大�。ɑ蛑睆剑﹣泶_定不同菌株降解PVA能力的大小．
（4）提取橘皮精油時，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時會發(fā)生部分水解，又會產生原料焦糊等問題，因此常采用壓榨法而不用水蒸汽蒸餾法．
故答案為：
（1）聚乙烯醇（或PVA）     多于
（2）血細胞（血球）    1.6×10⁹       偏小
（3）白色透明斑的大�。ɑ蛑睆剑�
（4）壓榨法   　橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時會發(fā)生部分水解，又會產生原料焦糊等問題

點評 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關知識，要求掌握選擇培養(yǎng)基應用，能夠根據題干信息確定培養(yǎng)基成分，掌握微生物分離與計數的方法．