Question

14．如圖是利用轉基因技術生產干擾素的簡化流程．請分析回答：

（1）過程①使用的（同一種）限制性核酸內切酶（限制酶）酶能使特定部位的兩個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵（化學鍵）斷開．運載體的黏性末端與目的基因DNA片段的黏性末端就可通過堿基互補原則     而結合． 過程②需要用到DNA連接酶酶，
（2圖中A的名稱是重組載體（重組質粒），它重組成功的物質基礎是干擾素基因的DNA與細菌質粒DNA的結構組成相同．
（3）A上應有RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動干擾素基因轉錄，該部位稱為啟動子．為直接檢測干擾素基因是否轉錄，可從細胞中提取RNA與用放射性同位素標記的目的基因作探針進行分子雜交，．
（4）利用PCR擴增儀大量擴增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要一段是已知的，以便根據(jù)這一序列合成DNA聚合酶（Taq酶），除了該物質和目的基因外，擴增儀中還需加入四種脫氧核苷酸和引物酶，并適時調整溫度，才能使目的基因數(shù)量成指數(shù)式增長．
（5）在該工程中所用的基因“剪刀”能識別的序列和切點是-G′GATCC-．請畫出質粒被切割形成黏性末端的過程圖

Answer 1

分析 基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的獲取
第二步：基因表達載體的構建
第三步：將目的基因導入受體細胞
第四步：目的基因的檢測和表達

解答 解：（1）切割目的基因和質粒需用同一種限制性核酸內切酶．限制酶破壞脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵，目的基因與質粒的黏性末端之間通過堿基互補配對連接起來，通過DNA連接酶構建重組質粒．
（2）由于干擾素基因的DNA與細菌質粒DNA結構組成相同，所以可構建重組質粒．
（3）驅動基因轉錄的結構是啟動子．檢測目的基因是否轉錄，可從細胞中提取RNA與用放射性同位素標記的目的基因作探針進行分子雜交．
（4）PCR的條件需有引物和耐高溫的DNA聚合酶，即Taq酶．
（5）黏性末端是兩條鏈，如圖：
-G′GATCC--G GATCC-
-C CTAGG--CCTAG G-
 故答案為：
（1）（同一種）限制性核酸內切酶（限制酶）  磷酸二酯鍵   堿基互補原則  DNA連接酶
（2）重組載體（重組質粒） 干擾素基因的DNA與細菌質粒DNA
（3）啟動子   RNA   目的基因
（4）引物    DNA聚合酶（Taq酶）
（5）-G′GATCC--G GATCC-
-C CTAGG--CCTAG G-

點評 本題結合利用利用轉基因技術生產干擾素的簡化流程，考查基因工程的技術及原理及應用，要求考生識記基因工程的原理及技術，能準確判斷圖中各過程的名稱，能運用所學的知識結合圖中信息準確判斷各題．