Question

14．研究表明，HER2/neu是一種原癌基因，它表達(dá)的H蛋白在多種惡性腫瘤特別是乳腺癌細(xì)胞中過量表達(dá)．抗H蛋白單克隆抗體能抑制過量表達(dá)H蛋白的乳腺癌細(xì)胞的生長，目前已成為有效的生物治療手段．
（1）選擇H蛋白作為單克隆抗體的作用靶點(diǎn)，是因?yàn)镠蛋白在成年個體的正常組織中低表達(dá)（填“低表達(dá)”或“高表達(dá)”）．H蛋白是一個跨膜蛋白，結(jié)構(gòu)如圖12所示．制備免疫小鼠用的H蛋白（抗原）時，應(yīng)構(gòu)建胞外區(qū)基因，轉(zhuǎn)入原核細(xì)胞表達(dá)并提純．
（2）將H蛋白注射到小鼠體內(nèi)，取該小鼠的脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，使用的化學(xué)誘導(dǎo)劑是PEG（或“聚乙二醇”），細(xì)胞融合的原理是細(xì)胞膜的流動性．
（3）將融合細(xì)胞在選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時間后培養(yǎng)基中只有雜交瘤細(xì)胞生長．將雜交瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)到多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，吸取有克隆生長的細(xì)胞培養(yǎng)孔中的上清液（填“上清液”或“沉淀細(xì)胞”），應(yīng)用抗原-抗體雜交技術(shù)進(jìn)行抗體陽性檢測．經(jīng)多次篩選，就能得到產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞．
（4）將篩選得到的雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)過體外（培養(yǎng)）或小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)，獲取大量的單克隆抗體．
（5）治療乳腺癌時，可單獨(dú)使用抗H蛋白單克隆抗體，也可將該單克隆抗體與抗癌藥物結(jié)合構(gòu)建“生物導(dǎo)彈”，殺死癌細(xì)胞．這充分體現(xiàn)了單克隆抗體特異性強(qiáng)（或“識別抗原部位專一”）的特點(diǎn)．

Answer 1

分析 單克隆抗體的制備過程是：對小動物注射抗原，從該動物的脾臟中獲取效應(yīng)B細(xì)胞，將效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，克隆化培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)），最后獲取單克隆抗體．
誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法有：物理法（離心、振動）、化學(xué)法（聚乙二醇）、生物法（滅活的病毒）．

解答 解：（1）根據(jù)題意可知，H蛋白在多種惡性腫瘤特別是乳腺癌細(xì)胞中過量表達(dá)，因此原癌基因的表達(dá)產(chǎn)物H蛋白在正常組織中低表達(dá)；由于抗體主要存在于細(xì)胞外液中，因此根據(jù)H蛋白的結(jié)構(gòu)圖可知，若用H蛋白制備抗原需要利用胞外區(qū)基因，由制備獲得的抗體作用于該抗原的胞外區(qū)．
（2）在制備單克隆抗體過程中，需要將脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，誘導(dǎo)其融合的試劑為聚乙二醇，其融合的原理是借助于細(xì)胞膜的流動性．
（3）將融合細(xì)胞接種在選擇培養(yǎng)基中，從中選出雜交瘤細(xì)胞，由于抗體蛋白質(zhì)相對質(zhì)量較輕，又因?yàn)榭贵w由細(xì)胞分泌出細(xì)胞，因此需要在吸取有克隆生長的細(xì)胞培養(yǎng)孔中的上清液，利用抗原-抗體雜交技術(shù)最后選出產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞．
（4）將雜交瘤細(xì)胞經(jīng)過體外培養(yǎng)或小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)，獲得大量的單克隆抗體．
（5）單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，靈敏度高．
故答案為：
（1）低表達(dá)   胞外
（2）骨髓瘤     PEG（或“聚乙二醇”）  細(xì)胞膜的流動性
（3）選擇   上清液   抗原-抗體雜交
（4）體外（培養(yǎng)）
（5）特異性強(qiáng)（或“識別抗原部位專一”）

點(diǎn)評 本題結(jié)合抑制癌癥的材料考查了單克隆抗體的相關(guān)知識，要求考生能夠從題干和題圖中獲取有效解題信息；識記單克隆抗體的制備過程以及細(xì)胞融合的誘導(dǎo)技術(shù)，識記單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)等方面的知識．