Question

【題目】科學(xué)家從某無(wú)限增殖細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中分離出無(wú)限增殖調(diào)控基因（prG)，該基因能激發(fā)細(xì)胞分裂，這為單克隆抗體的制備提供了新思路。某國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備探索利用基因工程生產(chǎn)單克隆抗體，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）實(shí)驗(yàn)室已獲得無(wú)限增殖調(diào)控基因（prG)。在體外，可采用__________技術(shù)大量擴(kuò)增該目的基因。該技術(shù)的基本反應(yīng)過(guò)程：目的基因DNA受熱___________后解鏈為單鏈，____________與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合，然后在DNA聚合酶的作用下進(jìn)行____________，如此重復(fù)循環(huán)多次。該技術(shù)的前提是要有___________，以便根據(jù)這一序列合成引物。

（2）該基因工程操作的核心是_________。本研究中，受體細(xì)胞為__________，欲將目的基因轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞，常采用___________方法。若實(shí)驗(yàn)成功，則受體細(xì)胞既能____________，又能____________。

（3）制備單克隆抗體通常選用細(xì)胞融合技術(shù)，使_______細(xì)胞與___________細(xì)胞融合，融合成功的細(xì)胞經(jīng)過(guò)篩選就是所需要的_____________細(xì)胞。

Answer 1

【答案】 PCR 變性 引物 延伸 一段已知目的基因的核苷酸序列 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 （經(jīng)抗原刺激）B細(xì)胞 顯微注射 無(wú)限增殖 產(chǎn)生抗體 （經(jīng)抗原刺激）B 骨髓瘤 雜交瘤

【解析】試題分析：PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。PCR的原理是DNA復(fù)制，需要的條件包括：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶)。PCR擴(kuò)增DNA的過(guò)程包括：高溫變性、低溫復(fù)性、中溫延伸過(guò)程。因此，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過(guò)程中，目的基因受熱形成單鏈并與引物結(jié)合，在Taq聚合酶的作用下延伸形成DNA。基因工程操作的四個(gè)基本步驟是：獲取目的基因,基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞和目的基因的檢測(cè)與鑒定.當(dāng)動(dòng)物細(xì)胞作受體細(xì)胞時(shí),一般采用顯微注射法將目的基因?qū)��?/span>。

(1) 結(jié)合前面的分析，為了得到大量的目的基因，可通過(guò)PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)。該技術(shù)首先是將目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，加入的一對(duì)引物分別與解開(kāi)的兩條單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合，然后在DNA聚合酶的作用下進(jìn)行延伸，如此重復(fù)循環(huán)多次。該技術(shù)的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。

(2)基因工程操作的四個(gè)基本步驟是：獲取目的基因、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞和目的基因的檢測(cè)與鑒定。其中核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建。抗體是由已獲得免疫的(經(jīng)抗原刺激)B細(xì)胞分泌的，將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞常采用的方法是顯微注射法，若實(shí)驗(yàn)成功，則受體細(xì)胞既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生抗體。

(3)制備單克隆抗體通常選用細(xì)胞融合技術(shù)，使(經(jīng)抗原刺激)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，融合成功的細(xì)胞經(jīng)過(guò)篩選就是所需要的雜交瘤細(xì)胞。