Question

14．丁酸梭菌，又名酪酸梭菌，是存在于人和禽畜腸道中的一種厭氧細(xì)菌，能抑制腸道中有害菌的生長并促進(jìn)有益菌的生長，可用作禽畜飼料添加劑．某科研人員從斷奶仔豬的盲腸內(nèi)容物中分離培養(yǎng)丁酸梭菌，進(jìn)行了一系列相關(guān)實(shí)驗(yàn)．配制丁酸梭菌增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的成分如表中所示．

成分	酵母膏	牛肉膏	胰蛋白胨	葡萄糖	可溶性 淀粉	氯化鈉	三水合 乙酸鈉	半胱氨酸 鹽酸鹽	蒸餾水
含量	3g	10g	10g	5g	1g	5g	3g	0.15g	1000mL

（1）微生物生長繁殖所需的培養(yǎng)基中的主要物質(zhì)有碳源、氮源、水和無機(jī)鹽．若要制備固體培養(yǎng)基，除上述成分外，還需加入的成分是瓊脂．為了保證無菌操作，調(diào)節(jié)pH后應(yīng)對培養(yǎng)基進(jìn)行處理，常采用的方法是高壓蒸汽滅菌法．
（2）除了保證無菌操作外，培養(yǎng)丁酸梭菌時(shí)還需要提供無氧環(huán)境，于37℃下培養(yǎng)36h左右．
（3）為統(tǒng)計(jì)丁酸梭菌的數(shù)目，將分離得到的一個(gè)丁酸梭菌菌落置于1L無菌水中，攪拌均勻后，取0.1mL上述液體用稀釋涂布平板法接種在一個(gè)培養(yǎng)皿上，重復(fù)操作，共制成三個(gè)帶菌培養(yǎng)皿，繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)三個(gè)培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)分別是236、227、242，則該菌落中丁酸梭菌的數(shù)目大致為2.35×l0⁶個(gè)．
（4）用上述方法測得的丁酸梭菌的數(shù)量小于（填“大于”、“等于”或“小于”）菌落中實(shí)際丁酸梭菌的數(shù)量，可能的原因是兩個(gè)或多個(gè)丁酸梭菌連在一起時(shí)形成一個(gè)菌落．

Answer 1

分析 1．培養(yǎng)基的概念、種類及營養(yǎng)構(gòu)成
（1）概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)．

（3）營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求．
2、微生物分離和純化的方法：
①平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面．
②稀釋涂布平板法：將駿業(yè)進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)．

解答 解：（1）微生物生長繁殖所需的培養(yǎng)基中的主要物質(zhì)有碳源、氮源、水和無機(jī)鹽．若要制備固體培養(yǎng)基，還需加入瓊脂作為凝固劑．為了保證無菌操作，調(diào)節(jié)pH后應(yīng)對培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌處理．
（2）根據(jù)題意可知，丁酸梭菌是一種厭氧細(xì)菌，因此除了保證無菌操作外，培養(yǎng)丁酸梭菌時(shí)還需要提供無氧環(huán)境，于37℃下培養(yǎng)36h左右．
（3）為統(tǒng)計(jì)丁酸梭菌的數(shù)目，需要采用稀釋涂布平板法，即將分離得到的一個(gè)丁酸梭菌菌落置于1L無菌水中，攪拌均勻后，取0.1mL上述液體接種在一個(gè)培養(yǎng)皿上，重復(fù)操作，共制成三個(gè)帶菌培養(yǎng)皿，繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)三個(gè)培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)分別是236、227、242，則該菌落中丁酸梭菌的數(shù)目大致=（236+227+242）÷3÷0.1×1000=2.35×l0⁶個(gè)．
（4）由于兩個(gè)或多個(gè)丁酸梭菌連在一起時(shí)形成一個(gè)菌落，因此用上述方法測得的丁酸梭菌的數(shù)量小于菌落中實(shí)際丁酸梭菌的數(shù)量．
故答案為：
（1）無機(jī)鹽     瓊脂     高壓蒸汽滅菌法
（2）無氧
（3）稀釋涂布平板     2.35×l0⁶
（4）小于      兩個(gè)或多個(gè)丁酸梭菌連在一起時(shí)形成一個(gè)菌落

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查微生物的實(shí)驗(yàn)室分離和培養(yǎng)，要求考生能夠掌握微生物分離與純化的方法，識(shí)記培養(yǎng)基配置的原則，掌握無菌技術(shù)的主要內(nèi)容，再結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題．