Question

10．如圖是獲得人乳鐵蛋白的技術路線．（圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI三種限制酶的酶切位點如圖所示）

據(jù)圖回答：
（1）已知人乳鐵蛋白基因的全部序列，可通過人工合成法或PCR技術獲得人乳鐵蛋白基因．據(jù)圖分析，過程①表示基因表達載體的構建．，該過程需要的限制酶是HindⅢ和BamHⅠ．篩選含有重組載體的大腸桿菌，培養(yǎng)基中應另添
加氨芐青霉素．
（2）圖中過程②最常用的方法是_顯微注射法．體外培養(yǎng)受精卵時，需將其置于含95%空氣加5% CO₂的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，C0₂的主要作用是維持培養(yǎng)液的PH．
（3）圖中過程④（填序號）表示胚胎移植，在胚胎移植前要對代孕牛進行同期發(fā)情處理．
（4）為檢測人乳鐵蛋白基因是否成功表達，可采用抗原-抗體雜交技術．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線，包括基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等步驟，其中過程②是將重組質粒導入受體細胞；過程④需采用胚胎移植技術．

解答 解：（1）已知人乳鐵蛋白基因的全部序列，可通過人工合成法或PCR技術獲得人乳鐵蛋白基因．過程①是基因表達載體的構建．外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位點，其中限制酶SmaI的切割位點位于目的基因上，所以獲取目的基因和構建基因表達載體時，應用限制酶HindⅢ和BamHⅠ．用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割質粒后，會破壞質粒上的四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行．
（2）過程②是將重組質粒導入受體細胞，當受體細胞是動物細胞時，將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法．5%CO₂的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，C0₂的主要作用是維持培養(yǎng)液的PH．
（3）過程④需要采用胚胎移植技術；在胚胎移植前要對代孕牛進行同期發(fā)情處理，使其處于相同的生理基礎．
（4）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用抗原-抗體雜交技術．
故答案為：
（1）PCR     基因表達載體的構建    HindⅢ和BamHⅠ氨芐青霉素      
（2）顯微注射法   維持培養(yǎng)液的PH
（3）④同期發(fā)情
（4）抗原-抗體雜交

點評 本題結合乳腺生物反應器培育過程圖和曲線圖，考查基因工程、胚胎工程、基因頻率的變化及生物進化等知識，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟，能準確判斷圖中各過程的名稱或采用的技術；識記胚胎分割技術的理論基礎，能提取圖中有效信息答題．