Question

14．反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)棲息著大量的乳酸產(chǎn)生菌如乳酸桿菌，可發(fā)酵產(chǎn)生大量的乳酸進(jìn)而導(dǎo)致瘤胃酸中毒的發(fā)生；同時(shí)瘤胃中還存在大量的乳酸利用菌，可發(fā)酵乳酸．
（1）乳酸是相應(yīng)的微生物進(jìn)行無(wú)氧呼吸（或發(fā)酵或呼吸作用或代謝）產(chǎn)生的，要分離和計(jì)數(shù)瘤胃液中的乳酸利用菌，必須先制備培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基以乳酸為唯一碳源，采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，采用稀釋涂布平板法法接種，并在適宜條件下培養(yǎng)．
（2）在觀察結(jié)果時(shí)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的菌落形態(tài)多樣，其原因可能是乳酸利用菌的種類(lèi)較多，或者操作過(guò)程污染了雜菌．
（3）體外模擬急性酸中毒條件下添加乳酸利用菌對(duì)瘤胃微生物體外發(fā)酵的影響．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：實(shí)驗(yàn)采用體外批次培養(yǎng)，每個(gè)發(fā)酵瓶接種12mL 經(jīng)過(guò)四層紗布過(guò)濾的新鮮瘤胃液，根據(jù)菌株接種量（0mL、4mL、8mL）分為3組，即T₀、T₄和T₈組，各組均設(shè)4個(gè)重復(fù)．如表所示，據(jù)此回答下列問(wèn)題：

	T0組	T4組	T8組
新鮮瘤胃液	+12mL	+12mL	+12mL
菌株接種量	0mL	4mL	8mL
無(wú)菌發(fā)酵液	X mL	Y mL	0mL
培養(yǎng)溫度	39℃	39℃	39℃

①該實(shí)驗(yàn)的自變量是菌株的接種量．
②菌株接種量不足8mL的發(fā)酵瓶，用該菌株的無(wú)菌發(fā)酵液補(bǔ)足8mL，以保證每個(gè)發(fā)酵瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液體積一致．表中的X、Y分別是8、4mL．
③39℃條件下培養(yǎng)18h，每間隔3h測(cè)定pH值（不測(cè)定初始值），同時(shí)收集樣品以備測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)的乳酸濃度．測(cè)定的乳酸濃度數(shù)據(jù)有72個(gè)．

Answer 1

分析 乳酸菌是能夠進(jìn)行染色體及的無(wú)氧呼吸的厭氧型原核生物．篩選和分離目的微生物應(yīng)該所以選擇培養(yǎng)基．微生物的接種方法常用的有平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法．據(jù)此分析作答．

解答 解：（1）題干所述乳酸是乳酸菌無(wú)氧呼吸產(chǎn)生的，要分離和計(jì)數(shù)瘤胃液中的乳酸利用菌，需要使用以乳酸為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基．培養(yǎng)基需要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌法滅菌．用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)．
（2）觀察結(jié)果時(shí)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的菌落形態(tài)多樣，可能的原因是乳酸利用菌的種類(lèi)較多，或者操作過(guò)程污染了雜菌．
（3）①據(jù)表分析，該實(shí)驗(yàn)的自變量是菌種的接種量．
②為保證無(wú)關(guān)變量的相同或一致，菌株接種量不足8mL的發(fā)酵瓶，需要用該菌株的無(wú)菌發(fā)酵液補(bǔ)足8mL，以保證每個(gè)發(fā)酵瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液體積一致．據(jù)表分析，表中的X為8ml，Y 為4ml．
③根據(jù)題意，每組均需測(cè)定6次pH，共3組，4個(gè)重復(fù)，所以測(cè)定的乳酸濃度數(shù)據(jù)有6×3×4=72個(gè)．
故答案為：
（1）無(wú)氧呼吸（或發(fā)酵或呼吸作用或代謝）    乳酸    高壓蒸汽滅菌      稀釋涂布平板法
（2）乳酸利用菌的種類(lèi)較多，或者操作過(guò)程污染了雜菌
（3）①菌株的接種量        
②無(wú)菌發(fā)酵液        8、4 
③72

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查微生物的生長(zhǎng)于分離及相關(guān)測(cè)定的實(shí)驗(yàn)，意在強(qiáng)化學(xué)生對(duì)微生物的篩選與分離的相關(guān)知識(shí)的理解與運(yùn)用．